dna izolasyonu

• kan veya dokudaki hücrelerde bulunan dna'nın ekstre edilmesi. çeşitli prosedürlerle dna ekstre edilebilir. örneğin, kandan dna ekstre edilirken ilk olarak nukleusu dolayısıyla dnası bulunmayan eritrositlerin uzaklaştırılması için tampon kullanılarak santrifuj edilir. santrifüj sonucu oluşan pellete tekrar tampon ve santrfüj uygulunarak çekirdek paçalanıp izole dna elde edilebilir.
• plasmid dna izolasyonu icin bir adet "qiagen kit" ile bes dakkada besiktas olan islem.
• bircok yontemin kullanilabilecegi islemdir, hangi yontemi sececeginize hazirladiginiz plana gore karar vermekte yarar vardir, en fazla tercih edilen metod fenol-kloroform ekstraksiyonudur, saf bir dna eldesi icin, cozunmus proteinleri iceren fenolu cok dikkatli ayirmak onemlidir
• efenim evde de yapılabiliyormuş bu:
  
  tuzlu suyla gargara yapıp inceltilmiş bulaşık deterjanının içine tükürüyoruz. daha sonra bardağın yan tarafından içeri yavaşça soğuk cin dökerek karışımın içinde uzun beyaz parçacıklar oluşmasını sağlıyoruz. işte bunlar dna'mız oluyor(muş).
  
  gelecek hafta eski çevirmeli bir telefonu gps'li camii minaresine çevircez.
• vakti zamanında en uzun dna izolasyonu işlemi bruno zimm adlı araştırıcı tarafından drosophiladan elde edilmiştir.(2,1 cm düz boyu) bu kadar büyük dna yı tek parça elde etmek oldukça güç işlem olduğundan özel izolasyon yöntemi geliştirmiştir.
  yönteminin kilit basamaklarının birini de deney örneğini 65 santigratta deterjan ile muamele etmek oluşturur.bu sayede dna nın koparılmasını önlemiş nükleazları inaktive etmiştir.
• öncelikle bir yaprağı havanda döverek başlayabileceğiniz aktivite sonrası resmen büyük bir çığ altında kalmak gibi. soğuk ve karanlık. işi çekilir kılan tek şey ise jel elektroforezi sonrası çıkan görüntüyü incelemek.
• arada bir kadın arkadaşlarına yaptığım izolasyondur. seçip beğenip alıyorlar.
  
  not: yanlış anlamamışımdır inşallah.
• dna izolasyonu,bazı kimyasal maddeler ve enzimler ile canlı hücreler ait hücre zarı ve çeperinin yıkılıp dna'nın ortaya çıkarılmasına dna izolasyonu denir.
  -dna parmak izi analizi
  -dna-protein etkileşimlerinin incelenmesi
  -genomik kütüphane hazırlanması
  -araştırma laboratuvarları ve endüstride
  kullanılan bir yöntemdir.
  
  bu yöntemde uygulanacak işlemler örnek maddeye göre değişkenlik gösterir ama net olarak 3 basamaktan oluşur. bunlar lysis, purification ve precipitation.
  lysis : hücre ufak parçalara ayrılması
  purification: dna-protein kompleksinin ayrıştırılması
  precipitation: dna'nın çöktürülmesi
  
  (örnek olarak karaciğeri alacağım)
  
  karaciğer örneği kesici bir alet yardımıyla ufak parçalara ayrılır ve tüpe konur.
  sonrasında içine (bkz: lysis tamponu) dökülür. ardından üzerine 0.1 mg proteinaz k koyulur.
  bu karışım içindeki karaciğer parçaları bıçaklı homojenizatör yardımıyla çok küçük parçalara ayrılır ve 'homojenat' oluşur.
  
  homojenat, 68 derece sıcaklıkta 15 dakika su banyosunda bekletir. ardından sıvı olan karışım alınıp ufak bir tüpe konur. ardından karışımımızı santrifüj (diferansiyel santrifüj) makinesine koyup dakikada 3000 rpm'e ayarlayıp 5 dakika konur.
  
  karışım santrifüj'den çıkarıldığında 2 faza ayrılmıştır. üstteki fazın adı supertant (içinde dna,rna ve protein bulunur) alttaki fazın adı ise pelet'tir (içinde membran parçaları ve organeller bulunur)
  
  supertant alınır ve bir miktar fenol ile dolu çok ufak bir tüpe konur. ardından bu çift fazlı karışım yine santrifüje konur. dakıkada 3000 devir ile 5 dakika boyunca makinada kalır.
  karışım çıkarıldığında 3 faz halindedir. üstteki faz dna (içinde bir miktar protein de var), ortada protein ve en alttaki faz fenol'dür.
  dna'nın içinde bulunduğu sıvı dikkatle alınır içinde 24:1 oranında kloroform izoamil alkol bulunan ufak bir tüpe aktarılır. bu karışım dakikada 3000 devir yapan santrifüjde 5 dakika bekletilir.
  
  çıkarılan sıvı 2 fazlıdır. üstteki fazda dna alttakinde ise kloroform vardır. dna'nin bulunduğu faz dikkatlice alınır ve içinde etanol ve amonyum asetat bulunan behere koyulup bir süre bekletilir.
  
  ta daaa iplik halindeki izole dna'mız hazır..