pcr

• bir moleküler biyoloji ya da biyoteknoloji laboratuarında herşeyin başı pcr'dır. çeşitli malzemeleri, çeşitli oranlarda karıştırıp, bir tür içerisinde hedef dna bölgesini, saykıl ^* sayısına bağlı olarak 10 üzeri anasının gözü kadar çoğaltmak hedeflenir, başarılır da. bunun için gerçekten de kary mullis'in yanaklarında öpülmelidir.
  ilk keşfedildiği dönemlerde bugün cihazda yapılan denaturasyon, annealing ve ekstenşın safhaları birebir manuel olarak, sıcak ve soğuk tanklara hızla örnekler aktarılarak yapılmakta imiş. bu sebeple halinize şükredin.
  bir de şu var; bio-rad'ın bir başka reklam filmi, ben çok eğlendimdi.
• genelde reaksiyonu başlatan primer'lerin iyi dizayn edilmemesi, annealing temperature' ın uygunsuzluğu, tampondaki tuz çeşidi gibi sebeplerden ortaya çıkan istenmeyen bantların orada olmasının bir başka sebebi de, kullanılan template konsantrasyonunun olması gerekenden yüksek oluşudur.
• pek çok çeşidi olan (asymmetric pcr, nested pcr, rt-pcr, multiplex pcr) bu tekniğin en tercih edileni real-time pcrdır.
  'bu teknik cetus firmasının insan genetiği departmanında çalışan araştırmacı kary mullis tarafından 1985’ te bulunmuş ve patenti alınmıştır. pcr; ilk defa, aynı yıl r. saiki, k. mullis ve arkadaşları tarafından orak hücre anemisinin tanısının konulmasında uygulamaya sokulmuştur. 1993 yılında bu çalışma kary mullis’ e nobel ödülünü kazandırmıştır.
  
  pcr, herhangi bir organizmaya ait genomik dna’ daki özgül bölgelerin çoğaltılmasını ( amplifikasyonunu ) sağlayan basit ama çok başarılı bir in vitro dna sentezi yöntemidir. pcr; dna molekülünün milyonlarca hatta milyarlarca kopyasını kısa zamanda yapan bir tekniktir. pcr;
  
  1) dna’ nın dizi analizi ve dna haritalamasında
  2) genetik hastalık teşhisinde ( orak hücre anemisi, kistik fibrozis, fragile x sendromu, aids, lösemi v.b. )
  3) dna parmak analizinde
  4) insan evrimi araştırmalarında
  5) insan genom projesi’ ndeki araştırmalarda
  6) allellik dizi varyasyonlarının gösterilebilmesi ile doku transplantasyonu için doku tipinin belirlenmesinde
  7) adli tıp örneklerinin genetik tiplendirilmesi ( analık babalık tayini )
  8) tarımda ( tohum saflığının belirlenmesi )
  9) sistematik ve evolüsyon çalışmalarında ( doğadaki çeşitli canlı türlerinin tanısı, türler arasındaki polimorfizmin belirlenmesinde )
  10) hatta mısır’ daki mumyalardan dna klonlamasında da kullanılmaktadır. (kaynak)
  
  makalesini okumak isteyen ilgili arkadaşlar için: [http://http/http://www.labtrade.com.br/…ds/2012/04/mullis86.pdf http://www.labtrade.com.br/…ds/2012/04/mullis86.pdf]
  
  kolay gelsin. kontaminasyonsuz, troubleshooting görmediğiniz döngüler dilerim.
• (bkz: program clock reference)
• ks. platform configuration register
• polymerase chain reaction (pcr) :polimeraz zincir reaksiyonu
  polimeraz zincir reaksiyonu, dna’nın belirli bir bölgesinin tüp içinde çoğaltılması işlemidir.
  
  pcr tekrarlanan 3 basamak şeklinde gerçekleşir. bu basamaklar;
  1.amplifiye edilecek dna’nın yüksek sıcaklıkta denatürasyonu (94ºc),
  2.primerlerin dna üzerindeki hedef bölgelerle özgül hibridizasyonuna olanak verecek sıcaklıktaki annealing birleşme reaksiyonu,
  3. taq dna polimeraz(taq polimeraz) enziminin yüksek aktivite
  gösterdiği sıcaklık olan 72ºc’de primerlerin uzaması-tamamlayıcı zincir sentezi olarak tanımlanabilir.
• dna'nın belirli bir segmentinin çoklu kopyalarını yapmak için moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. metot basitçe tüp içerisinde dna'nın uygun koşullarda çoğaltılması esasına dayanır. bu metot ile kısa süre içerisinde çok küçük miktarda dna baz dizisinden milyonlarca dna parçacığı çoğaltmak mümkündür.
  
  bir çeşit "in vitro klonlama" olarak da tanımlanan pcr; 94 °c-98 °c aralığında gerçekleştirilen denaturation, 37 °c-65 °c aralığında gerçekleştirilen annealing ve 72 °c’de gerçekleştirilen elongation aşamalarından oluşur ve bu döngülerin belirli sayıda tekrarlanarak dna'nın üssel olarak katlanmasına dayanır.
  
  pcr yaygın olarak kalıtsal hastalıkların teşhisi, genetik parmak izlerinin tanımlanması, bulaşıcı hastalıkların teşhisi, genlerin klonlanması, babalık testi ve dna hesaplaması gibi çeşitli konularda yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. ayrıca pcr'a dayalı rapd, aflp, ssr ve ıssr gibi markör teknikleri geliştirilmiştir. bu teknikler birçok bitki ve hayvanda tür içi ve türler arası genetik akrabalığın teşhisinde kullanılmaktadır.
  
  (bkz: polymerase chain reaction)
• bu uğraştırıcı şey adli tıpta ve babalık testinde de kullanılır.
• (bkz: covid-19 tanı testi)
• yellowstone milli parkinda kesfedilmis olan thermus aquaticus adli mikroorganizmadan ilk termostabil dna polimeraz izole edilmistir bu dna polimerazin 95 derece sicakliktaki yari omru 40 dakika kadardir bu sayede pcr calismalari yapilabilmektedir