chimera

• molekuler biyolojide homologous recombination teknolojisi kullanilarak yaratilan transgenic farelerde, modifikasyonu yaptiginiz kok hucrelerin kaynagi olan fare soyu (strain) ile transferi gerceklestirdiginiz embryonun kaynagi olan fare soyunun tuy rengi farki olmasindan oturu elde ettiginiz karma genotipli alacali tuylu hayvana verilen isimdir. su baglantidan bir ornegini gorebilirsiniz: http://www.aaas.org/…mages/0929stem_cells_mouse.jpg
  teknigin detaylarina gelince:
  oncelikle bir adet hedef locus belirlersiniz, burada yapilacak modifikasyona gore (knock-out, knock-in, conditional knock-out) strateji degisiyor; ancak konu dahilinde kalabilmek adina stratejileri aciklamayacagim bu baslik altinda, ozel ilgi duyan ya da yardima ihtiyaci olan benimle irtibata gecebilir. dizayn asamasini gectikten sonra gerekli yapiyi molekuler klonlama teknikleriyle yaparsiniz. kok hucreleri mililitrede 10-13 milyon olacak sekilde buyutup ozel electroporation tampon cozeltisi icerisinde dizayn yapiniz ile birlestirir ve electroporation yaparsiniz (ana fikir hucreleri oldurmeyen elektrik soku ile yabanci bir yapinin canli genomuna entegre olabilmesidir, mantik olarak gayet kaba gibi gorunse de detaylarda elit bir teknik sayilabilir). bu asamadan sonra dis faktorunuzle eklediginiz secici madde (selection denir ve antibiyotikler kullanilir genelde) varliginda sadece transforme olmus kok hucreler buyutulur. bir hafta on gun icinde de bireysel kok hucre kolonileri tek tek baska kultur kabina alinarak genetik tarama yapilir. 300-500 arasi bireysel koloni toplamak gerekli derler; ancak hedef locusun karakterine bagli olarak verim orani cok degiskendir. sahsen 500'de 1 transgenic elde edebilmisken baska bir arkadasimin 200'de 12 elde etmesi sacimi basimi yoldurmustur (bilim sabir gerektirir). sonra pozitif koloniler cogaltilir, ve bunlardan yine bireysel koloniler dollenmis embryolara enjekte edilir ve disi farenin rahmine cerrahi operasyonla aktarilir. boylelikle chimera dogar. renginin alacali olmasi size enjeksiyonun basarali oldugunu gosterir; ama bu sizin bu fareden yeni transgenic nesiller elde edebileceginiz anlamina gelmez her zaman. cunku bu hibrit durumu vucuttaki tum hucreler icin gecerlidir ve ureme hucrelerinde transgenic mevcut degilse (alandaki adi ile germ-line transmission yoksa) enjeksiyonu yinelemede fayda vardir. yine basarisiz olunuyorsa kok hucre asamasindan sifirdan baslamak tavsiye olunur.